分光光度計屬于精密儀器，應(yīng)當(dāng)妥善保管和精心維護(hù)，這樣才能保證分光光度計長期使用、長期的穩(wěn)定可靠、測量精度高。元析公司在多年的生產(chǎn)和應(yīng)用的過程中，得到了一套在一定環(huán)境下維護(hù)分光光度計的經(jīng)驗(yàn)，具體如下：

1、環(huán)境溫度在條件容許的情況下，盡量保持在15-30攝氏度之間，這樣能保持電器件穩(wěn)定工作，不易老化，使分光光度計不易損壞，燈源的使用壽命得到延長。若條件不容許，在高溫的情況下，縮短開機(jī)時間，使用分光光度計，使電器件不要長期保持在高溫下。在低溫下，使預(yù)熱時間比常溫下的預(yù)熱時間要長，這樣能保證在儀器穩(wěn)定的情況下進(jìn)行測試。

2、環(huán)境濕度在條件容許的情況下，盡量保持在60%以下，這樣能保證光度計內(nèi)部的光學(xué)件和電器件不易受潮、腐蝕、和上霉。若條件不容許，在高濕度和低濕度的情況盡量保持通風(fēng)。

1）預(yù)熱儀器。為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。

2）選定波長。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。

3）固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。

4）調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照）。

5）調(diào)節(jié)T=100％。將盛蒸餾水（或空白溶液或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械?格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100％，即表頭指針恰好指在T=100％處。

6）測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。

7）關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。

四、分光光度計的性能檢查（1）波長校正：使用光電比色計或分光光度計，在更換光源燈、重新安裝、搬運(yùn)或檢修后，以及儀器工作不正常時，都要進(jìn)行波長校正。就是正常工作的儀器，每隔一個月也要檢查一次波長，必要時進(jìn)行校正，這樣才能保證波長讀數(shù)與通過樣品的波長符合，保證儀器的zui大靈敏度。方法常用譜釹濾光片校正法，適用于721型儀可見光區(qū)的波長校正，常以585nm或529nm處的吸收峰或T%為標(biāo)準(zhǔn)。鑒于721型儀器的出射光波長較寬，不易將573nm和585nm的兩峰或兩谷分開，校正時易產(chǎn)生誤差，故推薦用529nm處的峰或谷為標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行波長校正。校正時，將儀器按要求預(yù)熱。要求電源電壓穩(wěn)定。波長度盤置580nm處，T%調(diào)至zui大，在比色杯處放一白紙條，觀察是否有光強(qiáng)均勻、邊緣無光暈或雜光的光斑，如不符合要求，可調(diào)節(jié)燈泡位置使其符合要求，是為波長校正的粗調(diào)。再把靈敏度扭置于“1”（zui低檔），波長度盤對準(zhǔn)529nm，電表機(jī)械零點(diǎn)為零，在光路空白時調(diào)T%為100%T，并反復(fù)查零點(diǎn)和100%T穩(wěn)定情況。將譜釹濾光片插入光路，慢慢旋轉(zhuǎn)波長度盤，找到透光率zui低的一點(diǎn)（向左右微旋波長度盤時，該點(diǎn)透光率值均增加），這一點(diǎn)即為波長529nm。檢查波長度盤的指示值是不是529nm，如指示值為534nm，此時波長工誤差為5nm，超出規(guī)定（±1nm）必須進(jìn)行調(diào)整。
　　調(diào)整方法：將波長度盤對準(zhǔn)529nm，從光路取出譜釹濾光片，光路空白時調(diào)電表指針到100%T，再將譜釹濾光片插入光路。打開儀器左側(cè)小蓋板，找到波長校正螺絲（3個中左側(cè)柄長的一個）；反時針方向微微調(diào)節(jié)（負(fù)誤差時順時針方向），使電表指針的指示T%為zui低。反復(fù)檢查波長誤差情況，直到符合儀器技術(shù)指標(biāo)為止。蓋好左側(cè)小蓋板，校正結(jié)束。

　　有些儀器如島津UV-260型雙光束分光光度計，可使用氫燈或置譜釹濾光片于測定比色槽內(nèi)，編入濾工掃描程序后，儀器即可自動地在一定波長范圍內(nèi)進(jìn)行波長校正。分光光度儀的光學(xué)系統(tǒng)密封在一個單元組件內(nèi)，若發(fā)生故障，波長不準(zhǔn)，常須請制造商派專人修理。其它尚有譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等，可參考有關(guān)資料。
　　（2）線性檢查：線性檢查包括儀器線性及測定方法線性兩個方面的檢查。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系，出現(xiàn)正偏離或負(fù)偏離的現(xiàn)象。這種偏離，按比耳定律的現(xiàn)象來自兩個方面：一是溶液本身不符合比耳定律，這種現(xiàn)象叫做化學(xué)偏離；二是儀器本身各種因素的影響，使吸光度測定值與濃度之間不成線性關(guān)系，這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者。儀器偏離的因素很多，如雜光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長的變動、比色杯的誤差、輻射光的非平行性、檢測器本身的非線性等。
　　儀器線性檢查常用一種在一定波長及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色物質(zhì)，配成不同濃度的溶液，來檢查儀器本身是否能如實(shí)地反映有色物質(zhì)的濃度變化。這種檢查方法與任何被測物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學(xué)上的問題無關(guān)。用測得的吸光度對濃度作圖，在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mg/L伊文藍(lán)濃度系列來檢查，波長用610nm。
　?。?）雜光（散光）檢查：在吸光度測定中，凡檢測器感受到的不需要的輻射都稱為雜光。雜光對吸光度測定法的準(zhǔn)確性有嚴(yán)重的影響，但卻往往被忽視。雜光的來源有：①儀器本身的原因，如單色器的設(shè)計、光源的光譜分布、光學(xué)原件的老化程度、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等；②室內(nèi)光線過強(qiáng)而漏入儀器，儀器暗室蓋不嚴(yán)；③樣品本身的原因，如樣品有無熒光、樣品的散射能力強(qiáng)弱等。
　　雜光檢測方法：①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測可用10±0.1g/L的碘化鈉溶液，在240nm處測定的吸光度應(yīng)大于2.00。此外，也可用12g/L的氯化鉀溶液，在220nm處測其透光度，即為雜光量，一般應(yīng)小于1%T。以上測定均用石英杯，以蒸餾水校零。②在可見光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜釹濾片校正波長，然后用黑紙片擋住比色杯光路（進(jìn)口儀器帶有比色杯樣黑色標(biāo)柱）之后調(diào)整0%T，再用空氣做空白調(diào)100%T。插入譜釹濾光片，在585nm處測定，其測定值即為雜光水平。
　?。?）比色杯的質(zhì)量檢查：比色杯一般由玻璃、石英或熒石制成，光徑1.0或0.5cm,光線通過時有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%），另一部分（很少）為玻璃吸收。比色杯的質(zhì)量除其原料外，再就是玻璃的厚度均勻，上下一致，各杯彼此相配。廠家多以四個一套供應(yīng)，且杯口上部外面標(biāo)有箭頭，箭頭對光源側(cè)使用。盡管如此，在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查。常用伊文藍(lán)法：將一定量的2.0mg/L的伊文藍(lán)溶液注入比色杯中，比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個比色杯作標(biāo)準(zhǔn)，用紅色濾光片（波長600～610nm），用水校零后將此杯的讀數(shù)準(zhǔn)確調(diào)至50%T，接著讀取其余杯的透光度。透光度相差在±0.5%T范圍內(nèi)者為合格。
　　（5）穩(wěn)定性檢查：檢查方法：將分光光度計及附件接于0.5kVA以上的可調(diào)變壓器，先調(diào)電壓為220V，波長固定在650nm，在光路比色杯裝以空白液，調(diào)讀數(shù)為90%T處，再將電壓升至230V及降至190V，觀察透光度的漂移值。若介于88.5%～91.5%T之間為合格。在電源電壓不變的條件下，在3分鐘內(nèi)其讀數(shù)漂移不應(yīng)超過標(biāo)尺上限值的±0.5%。
　?。?）重復(fù)性檢查：在波長、工作狀態(tài)、電源電壓、比色杯配套等合格的前提下，進(jìn)行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時，儀器對一種溶液重復(fù)測定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或等于標(biāo)尺上限值的1%。試驗(yàn)方法：將分析純重絡(luò)酸鉀于120～150攝氏度烘干2小時，干燥器中冷卻。精稱509.1mg于1000ml容量瓶中，以蒸餾水溶解并加至刻度，混勻（此液180mg/L鉻）。就用液為30、60、180mg鉻/L。取波長440nm，將應(yīng)用液各濃度管連續(xù)測3～5次，各濃度管中zui大誤差小于1%T為合格。
　?。?）靈敏度檢查：將重鉻酸鉀液配制成30和32.5mg鉻/L及120和122.5mg/L鉻的4種應(yīng)用液（濃度差兩組各為2.5mg/L鉻）。波長440nm，以水校零點(diǎn)，將上述應(yīng)用液連續(xù)測3次吸光度，兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度值差都不小于0.01為合格。